雖然各種培養基的組成各有不同,但商品化的干粉型培養基的配制方法大同小異。絕大多數合成培養基的生產都已標準化、商品化,較為常用的培養基可在市場上購得。這種干粉型培養基性質穩定,便于儲存、運輸,價格便宜,為使用和配制合成培養基帶來很大方便。特殊需求也多可在現有合成培養基基礎上補加或調整某些成分予以滿足。以往實驗室自購各個組分,稱量后再按一定順序進行溶解配制的老方法,一方面需購置大量各種各樣的成分,而且每種成分用量很少,很難控制和統一;另一方面要精確稱量,順序溶解,步驟繁瑣,質量難以保證。因此,自行配制培養基的方法除了因需要而專門配制一些特殊培養基外,大部分已不再使用。
1.配制用品
濾器、微孔濾膜、磁力攪拌器、O2、天平、燒杯、量筒、貯液瓶、瓶塞、注射器、pH計、NaHCO3、培養基、三蒸水、胎牛(小牛)血清、NaOH、HCI、青霉素、鏈霉素。
2.配制步驟
①將干粉型培養基溶于欲配制液體總量2/3的三蒸水,沖洗包裝袋兩次倒入培養液中,加人磁性攪棒并置于磁力攪拌器上充分攪拌,以確保培養基干粉充分溶解。
②按照產品包裝說明的要求和實驗需要補加NaHCO3和谷氨酰胺。
③加入抗生素:最終濃度為青霉素100U/mL,鏈霉素100ug/mL。(一般市售的青霉素為80萬單位/瓶,將其溶解于4mL三蒸水中,每升培養液中加人0.5mL;市售鏈霉素為1g/瓶,將其溶解在5mL中,每升培養液加人0.5mL。)
④加入所需濃度的經56℃水浴滅活的胎牛(或其他)血清,補加三蒸水至最終體積。(目前,血清均經過無菌處理。)
⑤調整培養液pH值:一般情況下市售干粉型培養基溶解后,pH值都有一相對穩定的數值,但某些因素例如配制液體使用的三蒸水、加人不同濃度的血清、采用CO2加壓過濾等,有可能使所配制液體的pH有所改變。因此,配制過程中,應強調采用新鮮制備的三蒸水并在加人血清后調整pH值,過濾除菌時宜采用O2加壓過濾。常規配制培養液時pH值常略偏堿,可采用HCI溶液進行調整,使用時可將預先配制的HCI溶液逐滴緩慢加入欲調整的偏堿的液體中并攪拌均勻,用pH計或pH精密試紙觀察調整結果達到pH7.2~7.4。
⑥將上述溶液用過濾法消毒除菌。所使用的濾器采用0.22um和0.45um濾膜各1張,常規高壓滅菌消毒。
⑦將經過濾除菌的培養液分裝于貼有標簽的無菌貯液瓶中,加蓋瓶塞,加封75%乙醇浸泡的玻璃紙,4℃存放。
3.注意事項
①配制培養液以及調節培養液pH值所使用的HCl和NaOH等溶液需新鮮制備的三蒸水,一般于配制當天制備,以保證水的純度和質量。
②配制培養基的各種器皿都應*清洗,烤干后備用。
③培養液配制過程中一般不需加熱助溶。
④培養液配制后應進行無菌試驗,以檢測培養液是否有污染。配制培養液所需血清的質量應保持穩定,同一項實驗應盡可能采用同一批號血清。
⑤每批次配制液體數量以使用2周左右為宜,以免時間過長造成營養成分損失。